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單核細(xì)胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)簡稱單增李斯特菌，是一種人畜共患病的病原菌。國際上公認(rèn)的李斯特菌共有十個(gè)菌株，而其中單增李斯特菌是唯一能引起人類疾病的菌株。單增李斯特菌進(jìn)入人體是否得病，與菌量、宿主的免疫狀態(tài)有關(guān)，因?yàn)樵摼且环N細(xì)胞內(nèi)寄生菌，宿主對它的清除主要靠細(xì)胞免疫功能，因此，新生兒、孕婦、40歲以上的成人，或免疫功能缺陷者很容易受到感染。健康成人個(gè)體感染后，單核細(xì)胞增多，會(huì)出現(xiàn)輕微類似流感癥狀；新生兒、孕婦、免疫缺陷患者感染后，表現(xiàn)為呼吸急促、嘔吐、出血性皮疹、化膿性結(jié)膜炎、發(fā)熱、抽搐、昏迷、自然流產(chǎn)、腦膜炎、敗血癥等，直至死亡。
單增李斯特菌廣泛存在于自然界中，它也是某些食物（主要是牛奶和乳制品，其他如肉類(特別是牛肉)；蔬菜；沙拉；海產(chǎn)品；冰淇凌等）中的一種污染物，能引起嚴(yán)重食物中毒。該菌能在2-42 ℃下生存(也有報(bào)道0 ℃能緩慢生長)，能在冰箱冷藏室內(nèi)較長時(shí)間生長繁殖，是冷藏食品威脅人類健康的主要病原菌之一，因此在食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)中，必須加以重視。
廣東環(huán)凱微生物科技有限公司長期從事微生物控制和檢測的相關(guān)研究，是我國最早研究、開發(fā)食品微生物安全檢測產(chǎn)品的廠家之一，對微生物檢測試劑有著成熟的研發(fā)及生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)。我公司針對目前乳制品行業(yè)及質(zhì)量監(jiān)測單位對單增李斯特菌檢測的需求及情況，對單增李斯特菌檢驗(yàn)相應(yīng)的培養(yǎng)基進(jìn)行了改進(jìn)，使得單增李斯特菌檢出率較之前有很大的改進(jìn)。擴(kuò)充并完善了相關(guān)的微生物檢測試劑，使得技術(shù)操作人員能更準(zhǔn)確、快捷的檢測出目標(biāo)菌。
單增李斯特菌為革蘭氏陽性短桿菌,直或稍彎，兩端鈍圓，常呈V字型排列，偶有球狀、雙球狀；兼性厭氧、無芽胞；一般不形成莢膜，但在營養(yǎng)豐富的環(huán)境中可形成莢膜；在陳舊培養(yǎng)中的菌體可呈絲狀及革蘭氏陰性；該菌有4根周毛和1根端毛，但周毛易脫落。該菌營養(yǎng)要求不高，在20-25 ℃培養(yǎng)有動(dòng)力，穿刺培養(yǎng)2-5天可見倒立傘狀生長，肉湯培養(yǎng)物在顯微鏡下可見翻跟斗運(yùn)動(dòng)。在的血平板上菌落中等大小，灰白色，可產(chǎn)生窄小的β-溶血環(huán)。
LB1與LB2中胰胨、多價(jià)胨和酵母膏粉提供氮源、維生素和生長因子；李斯特氏菌可耐受較高含量的氯化鈉，同時(shí)對腸球菌起抑制作用；磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉為緩沖劑；七葉苷為可發(fā)酵的糖類；萘啶酮酸對革蘭氏陰性桿菌的抑制性較強(qiáng)，而鹽酸吖啶黃素對除李斯特氏菌的革蘭氏陽性菌有較強(qiáng)的抑制作用，LB1與LB2兩種培養(yǎng)基對兩種藥物的的配比進(jìn)行了調(diào)整，一前一后進(jìn)行選擇性增菌，使得操作人員能順利的將李斯特氏菌從樣品中篩選出來。
李斯特氏菌雖對營養(yǎng)要求不高，但若營養(yǎng)不充分，在培養(yǎng)基上的菌落在接種后的一段時(shí)間內(nèi)將難以用肉眼觀察到，特別是對于剛剛復(fù)蘇的菌株，而0.6 %酵母浸膏胰酪大豆瓊脂(TSA-YE)能滿足李斯特氏菌的營養(yǎng)要求， 一般情況下利用其做純化培養(yǎng)；改良Mc Bride(MMA)瓊脂及TSA-YE上，用45°角入射光照射菌落，通過解剖鏡垂直觀察，菌落呈蘭色、灰色或蘭灰色。其成分中甘氨酸、氯化鋰、苯乙醇和復(fù)達(dá)欣可抑制非李斯特氏菌以外的部分革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌，但MMA抑制性過強(qiáng)，對李斯特氏菌的生長也有一定影響，所以其平板上菌落較小、形態(tài)不典型，很難與雜菌區(qū)分，因此，根據(jù)長期使用經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)合參考文獻(xiàn)，很多標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了修訂,采用PALCAM和單增李斯特菌顯色培養(yǎng)基對李斯特氏菌進(jìn)行平板分離。
PALCAM瓊脂中，蛋白胨提供生長必須的碳氮源；酵母膏粉和淀粉提供碳氮源、維生素和生長因子；氯化鈉可維持均衡的滲透壓；葡萄糖提供碳源；李斯特氏菌水解七葉苷與鐵離子反應(yīng)形成黑色的6,7-二羥基香豆素；甘露醇是可發(fā)酵的糖，酚紅是pH指示劑；氯化鋰和其它的抗生素能抑制革蘭氏陰性菌和大多數(shù)革蘭氏陽性菌。李斯特氏菌在PALCAM平板上生長24h后菌落呈黑色，直徑為1mm，在其周圍形成一個(gè)黑色環(huán)，培養(yǎng)48h，菌落仍呈黑色，直徑2mm～3mm，除在菌落周圍有一環(huán)外，在菌落中心部位的深層也形成黑點(diǎn)。
李斯特菌顯色培養(yǎng)基中，利用李斯特氏菌中特有的酶類及其作用，使不同的菌種顯現(xiàn)出不同的菌落形態(tài)，環(huán)凱CRM014李斯特顯色培養(yǎng)基中—單增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)顯藍(lán)色，菌落周圍有一不透明環(huán)，英諾克李斯特氏菌（Listeria innocua）在該培養(yǎng)基中同樣顯藍(lán)色，但菌落周圍無不透明環(huán)。
|
培養(yǎng)基：PALCAM瓊脂 |
培養(yǎng)基：李斯特顯色培養(yǎng)基 |
![\"PALCAM瓊脂-ATCC19115\"](\"/UploadFiles/main/Images/2014/11/20141128150753.jpg\")
| ![\"李斯特顯色培養(yǎng)基\"](\"/UploadFiles/main/Images/2014/11/20141128151037.jpg\")
|
依據(jù)GB 4789.30-2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)，我公司推出了一套單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)解決方案，為生產(chǎn)企業(yè)及檢驗(yàn)單位提供方便。
![\"GB](\"/UploadFiles/main/Images/2014/11/20141128151258.jpg\")
圖1：GB 4789.30-2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)流程圖
表1：實(shí)驗(yàn)操作所用培養(yǎng)基及生化試劑
功能階段
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實(shí)驗(yàn)
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產(chǎn)品序號
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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類別
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增菌
|
1
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CP0490
|
LB1增菌液
|
225mL×6瓶
|
盒（瓶裝）
|
026040
|
李氏增菌肉湯（LB1、LB2）基礎(chǔ)
|
250g
|
瓶（干粉）
| ||
SR0100
|
李氏增菌肉湯LB1配套試劑
|
10支
|
盒（西林瓶）
| ||
2
|
CP0500
|
LB2增菌液
|
225mL×6瓶
|
盒（瓶裝）
| |
026040
|
李氏增菌肉湯（LB1、LB2）基礎(chǔ)
|
250g
|
瓶（干粉）
| ||
SR0110
|
李氏增菌肉湯LB2配套試劑
|
10支
|
盒（西林瓶）
| ||
平板分離
|
3
|
026070
|
PALCAM瓊脂培養(yǎng)基
|
250g
|
瓶（干粉）
|
SR0140
|
PALCAM瓊脂配套試劑
|
10支
|
盒（西林瓶）
| ||
4
|
CRM014
|
李斯特菌顯色培養(yǎng)基
|
1000 mL
|
瓶（干粉）
| |
CRM014 P1
|
李斯特菌顯色培養(yǎng)基平板
|
90mm×20
|
盒（平板）
| ||
初篩
|
5
|
075070
|
木糖
|
20支
|
盒（西林瓶）
|
6
|
075110
|
鼠李糖
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
7
|
026020
|
胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂（TSA-YE）
|
250g
|
瓶（干粉）
| |
026020A
|
胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂平板（TSA-YE）
|
90mm×20
|
盒（平板）
| ||
生理生化
|
8
|
029010
|
革蘭氏染色液
|
10ml×4瓶
|
盒
|
10
|
075660
|
SIM培養(yǎng)管（SIM動(dòng)力培養(yǎng)基）
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
026050
|
半固體瓊脂
|
250g
|
瓶（干粉）
| ||
075350A
|
半固體瓊脂
|
10 ml×20支
|
盒（管裝）
| ||
075350
|
半固體瓊脂
|
20支
|
盒（西林瓶）
| ||
11
|
029161
|
過氧化氫酶試劑
|
2 mL/支×10
|
盒
| |
12
|
075010
|
葡萄糖
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
13
|
075030
|
麥芽糖
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
14
|
075040
|
甘露醇
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
15
|
075070
|
木糖
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
16
|
075140
|
七葉苷
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
17
|
075250
|
葡萄糖磷酸鹽胨水
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
029040
|
甲基紅試劑
|
10 mL
|
瓶
| ||
029050
|
VP試劑
|
10 ml×2
|
盒
| ||
18
|
024070
|
血平板（成品培養(yǎng)基）
|
90mm×20
|
盒（平板）
| |
024060
|
血瓊脂基礎(chǔ)
|
250g
|
瓶（干粉）
| ||
19
|
ATCC 6538
|
金黃色葡萄球菌
|
|
盒（西林瓶）
| |
ATCC 25923
|
金黃色葡萄球菌
|
|
盒（西林瓶）
| ||
CMCC(B) 26003
|
金黃色葡萄球菌
|
|
盒（西林瓶）
| ||
20
|
071820
|
單核增生性李斯特氏菌生化鑒定盒
|
10種×10次
|
盒（西林瓶）
| |
21
|
HK-MID-67
|
HK-MID-Listeria李斯特氏菌鑒定系統(tǒng)
|
10 tests
|
盒
| |
選作項(xiàng)目
| |||||
生理生化
|
22
|
026010
|
胰酪胨大豆酵母浸膏肉湯（TSB-YE）
|
250g
|
瓶（干粉）
|
SR0090
|
EB增菌液配套試劑
|
10支
|
盒（西林瓶）
|
在日常生活匯總，由于單增李斯特氏菌在4℃下仍然能生長繁殖，所以冰箱食品需加熱后再食用，防止食物中毒的危險(xiǎn)，
在食品生產(chǎn)行業(yè)中，單增李斯特氏菌在一般熱加工處理中能存活，熱處理已殺滅了競爭性細(xì)菌群，使單增李斯特氏菌在沒有競爭的環(huán)境條件下易于存活，所以在食品加工中，中心溫度必須達(dá)到70℃持續(xù)2分鐘以上。
相關(guān)國標(biāo)下載地址：
GB 4789.30-2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn) |
http://www.yycgb.cn/Train/HBdetail_105020015_100000035133931.html |
