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高速振蕩均質(zhì)器在食品微生物檢測的應(yīng)用

發(fā)布時間：2014-11-21      瀏覽次數(shù)：6289    分享：

高速振蕩樣品前處理器也叫脈沖均質(zhì)器，屬于無菌均質(zhì)器的一種，不同于拍擊式均質(zhì)器，高速振蕩樣品前處理器采用一種變革性的新技術(shù)，通過高頻率震動內(nèi)裝樣品的均質(zhì)袋，產(chǎn)生強烈沖擊波與高速攪動聯(lián)合作用，使樣品得到均質(zhì)。在微生物檢測樣本制備中，樣品中表面與較深層的微生物會充分而迅速地驅(qū)趕到樣品懸液，形成菌濃度均勻的樣品稀釋液。這個是食品微生物定量檢測中均質(zhì)前處理的關(guān)鍵步驟。

在食品微生物檢測中最多的是檢測細菌總數(shù)，以高速振蕩均質(zhì)器為例，有以下幾大步驟：

1、 樣品的稀釋

1.1 用開口器打開均質(zhì)袋后一起放上電子天平，按“去皮鍵”，然后直接稱取 25 g 樣品(固體/半固體/液體樣品)，再加入225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水。

控制面板可以用來自定義操作程序，可以保存20個程序，其中程序01（肥肉：1分鐘）; 程序02（粉狀物：15 秒）;程序03（膏狀物：1分鐘）；程序01，程序02，程序03是預(yù)先設(shè)置好的，不可以更改，其余每個程序可以通過控制面板進行更改或更新。

根據(jù)樣品選擇均質(zhì)時間(一般30秒至2分鐘)，制成 1:10 的樣品勻液。

1.2 用1mL無菌吸管或微量移液器吸取 1:10 樣品勻液 1 mL，沿管壁緩慢注于盛有 9 mL 稀釋液的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面)，振搖試管或換用 1 支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成 1:100 的樣品勻液。

1.3 按.1.2 操作程序，制備 10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用 1 次 1 mL無菌吸管或吸頭。

1.4 根據(jù)對樣品污染狀況的估計，選擇 2 個～3 個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液)， 在進行 10 倍遞增稀釋時，吸取 1 mL 樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取 1 mL 空白稀釋液加入兩個無菌平皿內(nèi)作空白對照。

1.5 及時將 15 mL～20 mL 冷卻至 46 ℃的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于 46 ±1 ℃全不銹鋼恒溫水浴鍋WBK-4中保溫)傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。

2 樣品培養(yǎng)

2.1 待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36 ±1 ℃電熱恒溫培養(yǎng)箱HKP-9172A中培養(yǎng)48 h±2 h。水產(chǎn)品 30 ±1 ℃培養(yǎng) 72 h±3 h。

2.2 如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層 瓊脂培養(yǎng)基(約 4 mL)，凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按 2.1 條件進行培養(yǎng)。

3 菌落計數(shù)

可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計數(shù)以菌落 形成單位(colony-forming units，CFU)表示。

3.1 選取菌落數(shù)在 30 CFU～300 CFU 之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于 30 CFU 的平板記錄具體菌落數(shù)，大于 300 CFU 的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。

3.2 其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù);若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以 2，代表一個平板菌落數(shù)。

3.3 當平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。

4 結(jié)果與報告

4.1 菌落總數(shù)的計算方法

4.1.1 若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每 g(mL)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。

4.1.2 若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按公式(1)計算：

4.1.3 若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于 300 CFU，則對稀釋度高的平板進行計數(shù)，其他平板可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以高稀釋倍數(shù)計算。

4.1.4 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于 30 CFU，則應(yīng)按稀釋度低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。

4.1.5 若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長，則以小于 1 乘以低稀釋倍數(shù)計算。

4.1.6 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30 CFU～300 CFU之間，其中一部分小于30 CFU或大于300 CFU 時，則以接近 30 CFU 或 300 CFU 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。

4.2 菌落總數(shù)的報告

4.2.1 菌落數(shù)小于 100 CFU 時，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報告。

4.2.2 菌落數(shù)大于或等于 100 CFU 時，第 3 位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前 2 位數(shù)字，后面用 0 代替位數(shù);也可用 10 的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。

4.2.3 若所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù)，則報告菌落蔓延。

4.2.4 若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。

4.2.5 稱重取樣以 CFU/g 為單位報告，體積取樣以 CFU/mL 為單位報告。