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食品中金黃色葡萄球菌檢測

發(fā)布時間：2014-06-20      瀏覽次數(shù)：8987    分享：

  金黃色葡萄球菌檢測在食品行業(yè)中至關(guān)重要。金黃色葡萄球菌是人類的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬，有“嗜肉菌"的別稱，是革蘭氏陽性菌的代表，可引起許多嚴(yán)重感染。而對于金黃色葡萄球菌在速凍食品中的存在量，衛(wèi)生部公布食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)《速凍面米制品》，允許金葡菌限量存在，也對金黃色葡萄球菌檢測做了相關(guān)規(guī)定。

實驗設(shè)備耗材

  吸管(1ml、10ml)、恒溫培養(yǎng)箱(36±1℃)、冰箱、均質(zhì)器、振蕩器、平皿、稀釋瓶、天平、顯微鏡、接種棒等

培養(yǎng)基和試劑

  金黃色葡萄球菌檢測需要用到試劑為：普通肉湯培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆肉湯、Baird-Prker瓊脂平板、緩沖蛋白胨水(BP)、凝固酶試驗凍干血漿

檢驗程序(非選擇性增菌法)

  檢樣25g+225mlBP胨水

  10ml勻液+10ml雙料胰胨肉湯

金黃色葡萄球菌檢測操作步驟

  1.稱取25g固體樣品;吸取25mL液體樣品，加入225mLBP胨水，固體樣品研磨或置均質(zhì)器中制成混懸液。

  2.吸取10mL上述混懸液，接種于10mL雙料胰蛋白胨大豆肉湯中，置36±1℃培養(yǎng)2h。

  3.再加入20ml 含20%NaCl的單料胰蛋白胨大豆肉湯，置36±1℃培養(yǎng)24±2h。

  4.劃線轉(zhuǎn)種2個表面干燥的Baird-Parker瓊脂平板上，36±1℃培養(yǎng)46±2h。

  5.挑取可疑菌落移種到肉湯培養(yǎng)基中，置36±1℃溫箱培養(yǎng)24h。

  6.取肉湯培養(yǎng)物0.3ml同0.5ml凝固酶試驗凍干血漿于8mm*100mm試管內(nèi)充分混合，置36±1℃培養(yǎng)，定時觀察是否有凝塊形成，至少觀察6h，以內(nèi)容物完全凝固，使試管倒置或傾斜時不流動為陽性。試驗中需同時做已知陽性和陰性對照。對可疑結(jié)果，應(yīng)進行革蘭氏染色、鏡檢和其他輔助試驗。

  7.本菌為革蘭氏陽性球菌，排列是葡萄球狀，無芽胞，無莢膜，致病性葡萄球菌菌體較小，直徑約為0.5～1μm。在Baird-Parker平板上為圓形、光滑凸起、濕潤、直徑為2～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度，偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落;但無混濁帶及透明圈。

  8.報告結(jié)果，如發(fā)現(xiàn)有凝固酶試驗陽性的菌落，即報告1g(ml)食品中有金黃色葡萄球菌存在，否則為陰性。