稀釋涂布平板法計數(shù)微生物的四大誤區(qū)
發(fā)布時間：2024-10-08 瀏覽次數(shù)：1685
今天要跟大家分享的是一篇關(guān)于平板菌落計數(shù)的文獻，雖然這篇文章更多的是針對應(yīng)試的，但是個人覺得對于我們在工作和科研實驗中的實際操作也是挺有用的。特別是對單位換算，樣品稀釋操作不是很清楚的小伙伴應(yīng)該會有一定幫助。
稀釋涂布平板法計數(shù)微生物的計算公式為：
每克樣品中的菌株數(shù) ＝ （Ｃ ÷ Ｖ） × Ｍ，Ｃ 代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，Ｖ 代表涂布平板時所用稀釋液的體積，Ｍ 代表稀釋倍數(shù)。
誤區(qū)1 對平均菌落數(shù)的理解
公式中的 Ｃ 不一定是所有實驗所得菌落數(shù)的平均值。 為增強實驗說服力和減小實驗誤差，實驗需設(shè)置對照實驗和重復(fù)實驗。若空白對照有菌，說明實驗可能被污染，相當(dāng)于質(zhì)控不在控，這種情況下不能將平板菌落數(shù)去平均值，而是需要分析可能污染的原因并重新進行實驗。
重復(fù)實驗是將同一稀釋度的稀釋液至少涂布３個平板（一般設(shè)置３—５ 個平板），選擇菌落數(shù)在 30—300 的平板計算平均菌落數(shù)。若重復(fù)實驗中某個平板的菌落數(shù)與其他差別甚遠，如四個平板的菌落數(shù)分別為 42、200、256、234，菌落數(shù)42與其他數(shù)值差異過大，說明該平板操作過程有誤，則該菌落數(shù)應(yīng)舍棄。 若舍棄后不足三個平板，不能用菌落數(shù)相近的兩個平板取平均值，應(yīng)找到原因并重做實驗。 若計算每克樣品中的某種菌株數(shù)，則 Ｃ應(yīng)代表某一稀釋度下平板上生長的符合該菌菌落特征的菌落數(shù)的平均值，培養(yǎng)基上其他菌種形成的菌落數(shù)不能一并計算在內(nèi)。 如檢測１L待測水樣中的大腸桿菌數(shù)目只統(tǒng)計大腸桿菌菌落數(shù)的平均值。
誤區(qū)二 對稀釋倍數(shù)的判定
平板中菌落數(shù)過少會導(dǎo)致計數(shù)誤差過大，菌落數(shù)過多又會造成計數(shù)困難，為確保有效活菌數(shù)的準確測定，應(yīng)合理設(shè)定稀釋倍數(shù)。待測樣品中微生物數(shù)量越多，所需稀釋倍數(shù)越大，而微生物數(shù)量越少，所需稀釋倍數(shù)越小。
如測定土壤中細菌數(shù)量，一般選用１０４、１０５和 １０６ 倍稀釋；測定放線菌數(shù)量，一般選用１０３、１０４和 １０５倍稀釋；測定真菌數(shù)量，一般選用 １０２、 １０３和 １０４倍稀釋；測定自來水中大腸桿菌數(shù)量，一般不稀釋，直接進行涂布培養(yǎng)。
圖源：人教版高中生物教材
誤區(qū)三 對體積與質(zhì)量的單位換算
微生物計算公式中的 Ｖ 代表涂布平板時所用稀釋液的體積，通常為0.1 ｍＬ，但若待測樣品中微生物數(shù)目較少，接種0.1mL經(jīng)培養(yǎng)后平板上菌落數(shù)達不到30，可增大接種量（如接種 １ ｍＬ）。
1cm3=1000μＬ=1mL=0.001L
體積和質(zhì)量的換算公式是：體積 ＝ 質(zhì)量÷ 密度（Ｖ ＝ ｍ／ ρ），水的密度是 １ ｇ／ cm3，則質(zhì)量為１g的水的體積是 １ cm3即１ｍＬ。
誤區(qū)四 對統(tǒng)計誤差的分析
從稀釋涂布平板計數(shù)的原理分析，運用該方法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低，因為樣品一般不易完全分散成單個細胞，當(dāng)兩個或多個活細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。從稀釋涂布平板計數(shù)的過程分析，稀釋倍數(shù)是否合適、涂布是否均勻、培養(yǎng)環(huán)境是否能保證微生物正常生長、計數(shù)是否存在漏計或重復(fù)計數(shù)等情況都會影響統(tǒng)計結(jié)果。 除此之外，還要考慮培養(yǎng)時間對菌落數(shù)目的影響，菌落數(shù)目需要每隔一段時間統(tǒng)計一次，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，防止因培養(yǎng)時間不足遺漏菌落的數(shù)目。
知其然，還要知其所以然。
參考文獻：張艷娟,陳兆亮,郭建坤.稀釋涂布平板法計數(shù)微生物的四大誤區(qū)[J].中學(xué)生理科應(yīng)試,2024,(04):52-53.
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