GB4789.2-2022新標(biāo)準(zhǔn)常見問題解答
發(fā)布時(shí)間：2022-12-23 瀏覽次數(shù)：2561
來源：六扇門Study
GB4789.2-2022自8月發(fā)布后，標(biāo)準(zhǔn)的使用者們都在研究領(lǐng)會(huì)新標(biāo)準(zhǔn)的變化，許多培訓(xùn)機(jī)構(gòu)、廠商也都舉辦了系列培訓(xùn)班。這期間，也冒出許多問題哦，小六收集了一些在線培訓(xùn)過程大家提出的問題，匯總了20個(gè)比較常見的，并給出參考答案，供大家參考哈。
有回答不到位的，歡迎小伙伴們補(bǔ)充及指正哈！有新的問題，也歡迎留言提出！
問題1：GB4789.2培養(yǎng)條款中，規(guī)定水產(chǎn)品30°C±1°C培養(yǎng)72ｈ±3ｈ，這里的水產(chǎn)品具體指什么？有具體的文件或者標(biāo)準(zhǔn)條款支持嗎？
答：水產(chǎn)品為帶有原生菌群，未通過加工工藝的水產(chǎn)品。凡經(jīng)過腌制，熟制等加工的屬于水產(chǎn)制品，不屬于水產(chǎn)品，具體可參照GB2760-2014的分類系統(tǒng)。
問題2：我們實(shí)際工作中，覆蓋一層培養(yǎng)基后還是會(huì)有蔓延整皿的情況，新國(guó)標(biāo)刪除了“報(bào)告菌落蔓延”的條款，這種情況我們?nèi)绾翁幚砟兀?/span>
答：可以數(shù)不蔓延的一半或者四分之一，報(bào)告時(shí)如25*2/4，代表計(jì)數(shù)的一半或四分之一平板。
問題3：如果覆蓋4mL平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基后還是沒有辦法抑制某些菌蔓延的話該怎么處理？
答：沒更好的辦法處理，這類情況一般都是樣本中含有芽胞菌，就是蔓延菌落。計(jì)數(shù)可參考問題2。
問題4：粘稠的液體樣品用天平稱取還是用吸管吸取比較好？
答：看產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)要求，無要求建議天平（精確小數(shù)點(diǎn)后一位即可）稱取，更準(zhǔn)確，以CFU/g報(bào)告檢測(cè)結(jié)果。
擴(kuò)展一下：國(guó)際上，一般粘度大于牛奶的按照固體樣本處理。
問題5：液體樣品直接檢測(cè)原液呢，是不是就不符合檢驗(yàn)步驟了呢？
答：符合，標(biāo)準(zhǔn)中指出液體可以從原液開始，這樣更接近真實(shí)結(jié)果。
問題6：傾注培養(yǎng)基，瓊脂溫度一直是控制在手能接受的溫度，這樣做可以嗎？
答：首先，建議水浴鍋保溫，水浴鍋設(shè)定在48℃，水溫恒定即可；其次，采用虎口能接受的溫度，而不是手。
問題7：一些樣品傾注后，平板底部有白色沉淀和顆粒存在，長(zhǎng)菌后不好鑒別結(jié)果，有沒有好的方法判斷？
答：一種方法：建議使用帶過濾功能的均質(zhì)袋，盡可能的過濾掉殘?jiān)?；另一種方法，可以使用測(cè)試片對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)數(shù)紅色菌落，白色顆粒殘?jiān)伙@色。
問題8：如果第一稀釋度兩個(gè)皿都沒有長(zhǎng)，第二稀釋度確長(zhǎng)了菌，這是什么原因？
答：一種情況是樣本中可能存在抑菌成分，建議多做2個(gè)稀釋梯度，保障結(jié)果準(zhǔn)確性。
問題9：那同一個(gè)稀釋度一個(gè)平板在是計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，另一個(gè)平板不在范圍內(nèi)，還是報(bào)告同一稀釋度的兩個(gè)平板的平均值嗎？
答：都可以 ，實(shí)驗(yàn)室自己規(guī)定，建議取平均值更貼近真實(shí)值。
問題10：有抑菌成分的產(chǎn)品，越稀釋越有菌，那怎么處理或者重新做樣呢？
答：不會(huì)一直越稀釋越有菌的，從梯度正常的稀釋度開始計(jì)數(shù)即可。
問題11：10稀釋度的兩個(gè)平板分別長(zhǎng)了2和3個(gè)菌落，最后結(jié)果是報(bào)告25還是30？
答：25，建議看看標(biāo)準(zhǔn)中菌落計(jì)數(shù)案例。
問題12：兩塊平行板的菌落數(shù)目偏差要求是多少？
答：沒有具體要求，目測(cè)偏差太大，會(huì)認(rèn)為均質(zhì)有問題。
問題13：測(cè)試片和平板傾注法檢測(cè)結(jié)果差異大，取決那個(gè)結(jié)果判定？
答：建議以平板傾注法檢測(cè)結(jié)果為準(zhǔn)，不同品牌的測(cè)試片依然會(huì)受樣本適用范圍的影響。
問題14：請(qǐng)問增加了測(cè)試片法 還需要做方法驗(yàn)證嗎？
答：首先，關(guān)于方法驗(yàn)證（Validation）如果廠家提供了充分的驗(yàn)證報(bào)告，直接采納驗(yàn)證報(bào)告的結(jié)果即可，原則上不需要再進(jìn)行系統(tǒng)化的驗(yàn)證，可以選擇1-2個(gè)基質(zhì)進(jìn)行比對(duì)驗(yàn)證。其次，實(shí)驗(yàn)室需要做的是方法確認(rèn)（Verification），如：使用定量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)開展實(shí)驗(yàn)確認(rèn)或者通過其他實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控手段證明。
問題15：所選擇的測(cè)試片，主要營(yíng)養(yǎng)成分與平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基成分配方一致，是什么意思？
答：主要營(yíng)養(yǎng)成分一致即符合，主要成分包括：胰蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖，至于其他成分如顯色劑、冷凝膠等各品牌配方可能會(huì)有差異。
問題16：之前檢測(cè)樣本，采用平板法和測(cè)試片法比對(duì)，測(cè)試片檢測(cè)結(jié)果偏低，為什么？
答：一種情況，可能選擇測(cè)試片生長(zhǎng)率偏低，建議按照GB4789.28做好驗(yàn)收；另一種情況，平板法中樣品的細(xì)小殘?jiān)?jì)數(shù)時(shí)會(huì)被誤當(dāng)做是菌落計(jì)數(shù)，而這些細(xì)小樣本殘?jiān)跍y(cè)試片上是不顯色的。
問題17：平板法和測(cè)試片偏差多少屬于符合？
答：可參照ISO16140-2，要求：由差值計(jì)算的β容忍區(qū)間在±0.5log之內(nèi)。
問題18：水化后的快速菌落測(cè)試片放置多長(zhǎng)時(shí)間后在進(jìn)行劃線會(huì)比較好？我們按照GB4789.28進(jìn)行驗(yàn)收的時(shí)候用菌液進(jìn)行劃線培養(yǎng)基容易粘在接種環(huán)上？
答：如果參照附錄E驗(yàn)收，建議水化至少1小時(shí)以上，8小時(shí)以內(nèi)。大家也可參照附錄D選擇參比TSA培養(yǎng)基，PR值PR≥0.7。
問題19：CNAS和CMA變更 是否需要做方法確認(rèn)？
答：涉及到技術(shù)參數(shù)的需要做方法確認(rèn)（人、機(jī)、料、法、環(huán)），如使用測(cè)試片。
問題20：如果不使用測(cè)試片， CNAS做方法變更需要做這部分確認(rèn)實(shí)驗(yàn)嗎？
答：如果不使用測(cè)試片，可以不做方法證實(shí)及實(shí)驗(yàn)確認(rèn)，在填寫變更申請(qǐng)表時(shí)，表格有一個(gè)特定的條款，在里面填寫不用測(cè)試片即可。
