培養(yǎng)基無(wú)法凝固常見(jiàn)的原因
發(fā)布時(shí)間：2022-12-05 瀏覽次數(shù)：23909
微生物培養(yǎng)基用來(lái)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)細(xì)菌、真菌等微生物，通常有固體和液體兩種類型。液體培養(yǎng)基又通常稱為肉湯，而固體培養(yǎng)基通常稱之為瓊脂培養(yǎng)基，這是因?yàn)楣腆w培養(yǎng)基當(dāng)中通常添加了瓊脂成分，起到凝固培養(yǎng)基的作用。
瓊脂：又叫瓊膠，為無(wú)色、無(wú)固定形狀的固體，溶于熱水。瓊脂最有用的特性是它的凝點(diǎn)和熔點(diǎn)之間的溫度相差很大。它在水中需加熱至95℃時(shí)才開(kāi)始熔化，熔化后的溶液溫度需降到40℃時(shí)才開(kāi)始凝固?；诃傊倪@些特性，其在生物實(shí)驗(yàn)室中有著廣泛的應(yīng)用，例如制作微生物培養(yǎng)基的凝固劑，作為瓊脂糖凝膠電泳時(shí)的電泳支持介質(zhì)等等。
但是配置培養(yǎng)基時(shí)，培養(yǎng)基通常會(huì)出現(xiàn)配置之后呈現(xiàn)流體，半流體不能凝固的狀態(tài)，難以凝固，以下是一些常見(jiàn)的培養(yǎng)基無(wú)法正常凝固的原因。
1 瓊脂添加量較少
自行配置培養(yǎng)基時(shí)，需要嚴(yán)格按照培養(yǎng)基配置的配方比例進(jìn)行，固體培養(yǎng)基配置時(shí)通常保證每升添加12g以上的瓊脂量。配置半固體培養(yǎng)基時(shí)，通常會(huì)減少瓊脂額用量，所以如果瓊脂用量少的話，會(huì)影響培養(yǎng)基的凝固，無(wú)法形成固體。
2 使用劣質(zhì)瓊脂
同上，因?yàn)榄傊怯绊懪囵B(yǎng)基凝固的關(guān)鍵，所以使用質(zhì)量不好的、過(guò)期的、變質(zhì)的瓊脂，同樣會(huì)影響培養(yǎng)基的凝固效果。
3 pH值不準(zhǔn)確
這點(diǎn)是很多人配置培養(yǎng)基過(guò)程中會(huì)忽略的因素。配置的培養(yǎng)基最好保持在5-10的pH區(qū)間，pH過(guò)低時(shí)，會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基酸化，影響瓊脂的凝固效果。通常來(lái)說(shuō)，按照正常流程進(jìn)行配置都能保證pH在正常范圍內(nèi)，但是仍然有一些因素可能導(dǎo)致pH變化，值得注意。
例如，使用的水pH過(guò)低，所以盡量使用桶裝水較好。另外，滅菌前后去測(cè)量的話，也會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基pH有降低的情況，這主要是因?yàn)樵陂L(zhǎng)時(shí)間的高溫情況下，會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)分解，成分改變，從而影響pH；因此不同培養(yǎng)基因?yàn)槌煞钟兴町?，滅菌前后pH變化也并不一致，另外含有緩沖劑的培養(yǎng)基其pH變化會(huì)較小。因此通常建議配置培養(yǎng)基時(shí)，先把培養(yǎng)基pH值調(diào)到比原來(lái)略高0.4-0.5的值。
4 培養(yǎng)基未完全溶解
例如在配置時(shí)直接使用冷水進(jìn)行溶解，瓊脂只溶于熱水而無(wú)法溶于冷水，使用冷水進(jìn)行溶解不能使瓊脂完全溶解和分散均勻。
使用熱水進(jìn)行溶解，但也并未煮沸，一定要煮沸，保證完全溶解之后再去分裝滅菌。滅菌結(jié)束之后倒平板的時(shí)候，也建議一定要先進(jìn)行搖勻再倒板，否則可能會(huì)出現(xiàn)前面倒的板子凝固不好，而后面的板子才能凝固的情況。
5 加熱過(guò)度
加熱過(guò)度一般是指滅菌溫度過(guò)高，或者時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，或者反復(fù)多次進(jìn)行加熱溶解。先前說(shuō)過(guò)滅菌過(guò)后，培養(yǎng)基內(nèi)成分會(huì)發(fā)生一些變化，特別是在過(guò)度的加熱過(guò)后，可能會(huì)影響培養(yǎng)基的凝固，同時(shí)因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)成分較大的變化，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果也會(huì)產(chǎn)生影響，因此不建議反復(fù)過(guò)度的加熱和滅菌。
6 環(huán)境溫度
環(huán)境本身溫度過(guò)高，例如在一些悶熱的空間，或者較高溫度的夏天時(shí)，培養(yǎng)基不能很好的凝固。因此建議可以適當(dāng)?shù)奶岣攮傊褂玫牡谋壤?，以更好地使培養(yǎng)基凝固。
以上是一些培養(yǎng)基無(wú)法凝固常見(jiàn)的原因。其實(shí)總結(jié)來(lái)看基本都和瓊脂有關(guān)，可能是因?yàn)榄傊砑虞^少，或者未完全溶解，或者因?yàn)闃O端的溫度或Ph條件被破壞。因此比起自己按照不同成分比例配置培養(yǎng)基，選擇商業(yè)化的培養(yǎng)基或許是個(gè)更好的選擇，因?yàn)槎际桥渲煤玫谋壤?，能更好保證瓊脂量的準(zhǔn)確。另外，正常配置的情況下Ph值也更為穩(wěn)定。
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