腦膜炎奈瑟菌檢測
發(fā)布時間：2022-11-30 瀏覽次數(shù)：2226
腦膜炎奈瑟菌（N. meningitidis）簡稱為腦膜炎球菌（meningococcus），是一種革蘭氏陰性菌，是流行性腦脊髓膜炎（簡稱流腦）的病原菌。因其所導(dǎo)致的腦膜炎而聞名，亦會造成腦膜炎球菌血癥(一種致命性的敗血癥)。它只感染人類，并無寄生的動物，是唯一令細(xì)菌性感染腦膜炎成為流行病的病菌。約10%成人的鼻咽中有它的蹤跡。
一、生物學(xué)特性
1、形態(tài)與染色：為革蘭陰性雙球菌，菌體呈腎形，成對排列，坦面相對， 菌體直徑0.6~1.5μm，在患者的腦脊液中可位于中性粒細(xì)胞內(nèi)、外。無鞭毛，不形成芽胞，有菌毛，新分離菌株有莢膜。
2、培養(yǎng)特性：營養(yǎng)要求高，屬苛養(yǎng)菌，必須在含有血清或含有多種氨基酸、無機(jī)鹽等物質(zhì)的培養(yǎng)基上生長良好。最適溫度為35 ~37℃ ,最適pH為7.4~7.6。
3、生化反應(yīng)：絕大多數(shù)菌株能分解葡萄糖和麥芽糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣（因淋病奈瑟菌不分解麥芽糖，借此與之鑒別），不分解乳糖、甘露醇、半乳糖和果糖，硝酸鹽還原試驗陰性。不分解尿素、不產(chǎn)生H2S和靛基質(zhì)，觸酶試驗陽性，氧化酶試驗陽性。
4、抗原及分型
主要有四種抗原：莢膜多糖群特異性抗原、外膜蛋白型特異性抗原、脂多糖抗原及核蛋白抗原。根據(jù)群特異性莢膜多糖抗原不同，采用凝集反應(yīng)和瓊脂擴(kuò)散試驗可 將本菌分為A、B、C、D、X、Y 、Z、1916、 29E和W135等。
目前，對人致病的主要是A群，偶見B群、C群及1916群引起散發(fā)病例。
二、微生物檢驗
1、標(biāo)本采集：血液瘀斑滲出液腦脊液鼻咽分泌物。因本菌能產(chǎn)生自溶酶，易自容，故采集的標(biāo)本不宜置冰箱，應(yīng)立即送檢，35℃保溫。
2、檢驗方法及鑒定
1)直接涂片檢查：取腦脊液離心后沉淀物涂片或刺破瘀斑血印片，干燥固定后革蘭染色，若發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞內(nèi)(或胞外)革蘭陰性奴球菌，呈腎形成對排列，可初報。
2)分離培養(yǎng)：將標(biāo)本的葡萄糖肉湯增菌培養(yǎng)液直接接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂或 EPV瓊脂，置5% ~ 10%CO2環(huán)境中，35 ~37℃培養(yǎng)18 -24h后可見圓形、灰褐色濕潤、光滑、 邊緣整齊、直徑1~2mm的小菌落，經(jīng)涂片證實為革蘭陰性雙球菌，并進(jìn)一步根據(jù)相應(yīng)的生化反應(yīng)等試驗予以鑒定。
3)鑒定：該菌的鑒定主要通過氧化酶、糖類發(fā)酵和血清學(xué)等試驗。
①細(xì)菌染色形態(tài);
②氧化酶試驗陽性;
③觸酶試驗陽性;
④分解葡萄糖、麥芽糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣;
⑤莢膜多糖抗原直接凝集試驗。
直接鏡檢形態(tài)為革蘭染色陰性雙球菌時可初報，經(jīng)分離培養(yǎng)后見菌落特征典型生化反應(yīng)能力弱，只分解葡萄糖、麥芽糖、產(chǎn)生少量酸，氧化酶試驗陽性。血清凝集試驗陽性，即可報告“檢出腦膜炎奈瑟菌”。
三、核酸擴(kuò)增法
流行性腦膜炎的臨床診斷通常以出現(xiàn)發(fā)熱、嘔吐、頭痛等臨床癥狀為依據(jù)。進(jìn)一步的確診則需在病人腦脊液或急性衄液中分離到腦膜炎雙球菌。但分離培養(yǎng)方法的檢出陽性率較低。并且至少需要2～3 d才能確診感染，這對疾病的及時治療極為不利。此外，受抗生素使用及其他非特異性因素的影響，分離培養(yǎng)法的靈敏度不高，極大地降低了診斷結(jié)果的可靠性。因此，尋找一種快速、靈敏并且適用于I臨床診斷的檢測方法已顯得非常需要。
近年來，因為具有特異性好、靈敏度高、檢測周期短等優(yōu)點，在PCR的基礎(chǔ)上建立的基因診斷技術(shù)已廣泛應(yīng)用于多種病原微生物的臨床檢測。四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院聯(lián)合四川省疾病預(yù)防控制中心以PCR技術(shù)為基礎(chǔ)，結(jié)合我國流腦的流行現(xiàn)狀，建立了Nm ABC群的快速診斷方法。
四、快速診斷法
依據(jù)是腦膜炎患者腦脊液及血清中存在腦膜炎奈瑟菌可溶性抗原。因此可采用已知的抗體檢測有無相應(yīng)的抗原。
1、對流免疫電泳：此法較常規(guī)培養(yǎng)法敏感，特異性高。一般1小時內(nèi)即可得到結(jié)果。
2、SPA協(xié)同凝集試驗：將待檢的患者腦脊液或血清與已知腦膜炎奈瑟菌IgG類抗體標(biāo)記的產(chǎn)生SPA的金黃色葡萄球菌混合。若標(biāo)本中存在腦膜炎奈瑟菌的可溶性抗原，則使抗體標(biāo)記的金黃色葡萄球菌聚集在一起，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。
五、防治原則
預(yù)防腦膜炎奈瑟菌感染的關(guān)鍵是要盡快消除傳染源、切斷傳播途徑及提高人群免疫力。
我國1980年正式使用A群多糖菌苗，臨床觀察表明對學(xué)齡兒童和成人保護(hù)率可達(dá)90%。但此種疫苗對2歲以下嬰幼兒免疫原性差，其一是因為腦膜炎莢膜多糖抗原屬于T細(xì)胞非依賴抗原，免疫效果與接種者年齡有明顯的依賴關(guān)系；其二，多糖菌苗誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的IgG抗體主要為IgG2亞類，出現(xiàn)較遲，一般到8～12歲才能上升至成人水平。
因此，嬰幼兒接種多糖菌苗后往往以產(chǎn)生短暫的IgM抗體為主。國外采用A群和C群多糖與白喉毒素蛋白偶聯(lián)的偶聯(lián)菌苗接種8～10周齡的嬰兒，證明這種偶聯(lián)菌苗具有良好的免疫原性及安全性。
流腦的治療首選藥物為青霉素G，劑量要大。對青霉素過敏者，可用氯霉素或紅霉素。
