產(chǎn)品名稱：T7 Endonuclease Ⅰ
中文名稱：T7 核酸內(nèi)切酶Ⅰ
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 （點(diǎn)擊名稱進(jìn)入下單頁面） | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價(jià)格 |
| HKM017系列 | T7 Endonuclease Ⅰ | 250U | 250U×5 | crispr基因編輯（T7 核酸內(nèi)切酶Ⅰ） | — |
| HKM017-01A | T7 Endonuclease Ⅰ | 250U | 540 | |
| HKM017-02A | T7 核酸內(nèi)切酶 Ⅰ | 250U×5 | 2398 |
產(chǎn)品描述：T7 Endonuclease Ⅰ 識(shí)別并切割不完全配對(duì)DNA、十字型號(hào)結(jié)構(gòu)DNA、Holliday 結(jié)構(gòu) 或 交叉DNA、異源雙鏈DNA 或者以更慢的速度切割含切刻的 雙鏈D'NA。該酶切割錯(cuò)配堿基 5’端的第一、第二或第三個(gè)磷酸二酯鍵。
產(chǎn)品用途：
1) 基因突變和SNP的檢測(cè)，可應(yīng)用于TALEN、CRISPR/Cas9 基因編輯形成的突變體檢測(cè)；
2) 識(shí)別錯(cuò)配DNA，分解四方向交叉DNA或分支DNA；
3) 檢測(cè)或切割異源二聚體DNA和切割DNA；
4) 隨機(jī)切割線性DNA進(jìn)行shot-gun 克隆。
應(yīng)用實(shí)例：圖例) T7E1法檢測(cè)突變體
泳道1：野生型條帶700bp；
泳道2：突變型條帶700bp；
泳道3：野生型條帶與突變型條帶退火，產(chǎn)生T7EI 切割條帶300bp+400bp。
注意事項(xiàng)：T7核酸內(nèi)切酶Ⅰ是一種具有底物結(jié)構(gòu)選擇性的酶。該酶以不同的活性作用于不同的DNA底物。切割特定底物時(shí)，必須控制酶量和反應(yīng)時(shí)間。反應(yīng)溫度超過42°C時(shí),會(huì)增加非特異性核酸酶活性。避免反應(yīng)溫度超過55C，會(huì)導(dǎo)致酶活性降低。
保存溫度：-20℃保存。
T7 Endonuclease Ⅰ 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
| 產(chǎn)品組成 | 體積 |
| T7 Endonuclease Ⅰ(10U/μl) | 25 μl |
| 10×T7 Endonuclease Ⅰ Reaction Buffer | 1 mL |
| Control primer(10μM) | 20 μl |
| Control template C (30ng/μl) | 10 μl |
| Control template D (30ng/μl) | 10 μl |
質(zhì)量保證：經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE 膠檢測(cè)僅可見清晰單一的目的條帶，純度達(dá)90%，PCR方法檢測(cè)無大腸桿菌DNA殘留，無核酸內(nèi)、外切酶污染。
活性定義：1 單位指在50μl反應(yīng)體系，37°C條件下，1小時(shí)將90%以上的 1μg 超螺旋十字型結(jié)構(gòu)pUC(AT)轉(zhuǎn)化成線性 DNA結(jié)構(gòu) 所需的酶量。
操作步驟：
1、分別以突變體DNA和野生型DNA為模板，PCR擴(kuò)增含突變位點(diǎn)的片段，片段長(zhǎng)度約500bp，突變位點(diǎn)避免位于片段中間，便于區(qū)分切割后條帶；
2、變性退火PCR產(chǎn)物
3、酶切反應(yīng)：上一步反應(yīng)液中加入0.5ul T7EI 酶，37°C 保溫15-30min，立即加入DNA loading buffer 終止反應(yīng)，混勻后65°C保溫 10 min，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)酶切結(jié)果。
