產(chǎn)品名稱：NLS-Cas9(D10A,H840A) Nuclease
中文名稱：NLS-Cas9(D10A,H840A) 核酸酶
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價(jià)格 |
| HKE378 | NLS-Cas9(D10A,H840A) Nuclease | 50μg/盒 | crispr基因編輯（核酸酶） | 1575 |
產(chǎn)品描述：
CRISPR/Cas9 是細(xì)菌和古細(xì)菌在長(zhǎng)期演化過(guò)程中形成的一種適應(yīng)性免疫防御系統(tǒng)，改造后的 II 型 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)在基因的定點(diǎn)修飾中展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用潛能。脫靶效應(yīng)是目前 CRISPR/Cas9 技術(shù)應(yīng)用 的一個(gè)難題，在基因編輯應(yīng)用中，可能會(huì)出現(xiàn)難以預(yù)測(cè)的后果。
本制品是 spCas9 Nuclease 的一個(gè)突變體。Cas9 Nuclease 具有兩個(gè)切割活性中心，從而實(shí)現(xiàn)在 sgRNA 靶序列特定位點(diǎn)引入 DNA 雙鏈 斷 裂 （ DSB ） 。 NLS-Cas9 (D10A,H840A) Nuclease 在 Cas9Nuclease 基礎(chǔ)上突變兩個(gè)切割活性中心，使其只具有靶 DNA 結(jié)合活 性，但無(wú)切割活性，并且通過(guò)在蛋白兩端加了核定位信號(hào)（NLS），可使蛋白進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)發(fā)揮作用。
產(chǎn)品特點(diǎn)：純蛋白體系，避免 CRISPR 基因敲除時(shí)引入質(zhì)粒或病毒干擾；
保存體系：10mM Tris-HCl，300mM NaCl，0.1mM EDTA，50% Glycerol， PH7.4，25℃。
保存溫度：-20℃保存，或-80℃長(zhǎng)期保存。
NLS-Cas9(D10A,H840A) Nuclease 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
| 產(chǎn)品組成 | 體積 |
| NLS-Cas9(D10A,H840A) Nuclease(0.1μg/μl) | 500 μL |
| 10×Reaction Buffer | 1 ml |
質(zhì)量保證：經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE 膠檢測(cè)僅可見(jiàn)清晰單一的目的條帶，純度達(dá) 95%；內(nèi)毒素含量< 0.1EU/μg；qPCR 方法檢測(cè)無(wú)大腸桿菌基因組殘留；無(wú) RNase、核酸內(nèi)、外切酶污染。
體外切割體系（20μL）：
| dsDNA | 200 ng |
| sgRNA | 200 ng |
| Cas9(D10A, H840A) Nuclease | 200ng |
| 10×Reaction Buffer | 2 μl |
| RNase Free Water | To 20 μl |
37 ℃保溫 1 h、70℃保溫 10 min
注：在反應(yīng)體系中可添加 RNase Inhibitor 至 1U/μl，防止RNase 污染。
相關(guān)產(chǎn)品：
| HKE365 | NLS-Cas9 Nuclease |
| HKE366* | Cas9（D10A）Nickase |
| HKE367** | Cas9（H840A）Nickase |
| HKE369 | sgRNA In Vitro one-step Transcription Kit |
| HKE370 | sgRNA Screening and Genotype Confirmation Kit |
* 為 Cas9(D10A) Nickase，能在與 sgRNA 靶序列互補(bǔ)的 DNA 鏈上產(chǎn)生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，可以減少意外的脫靶基因修飾。
** 為 Cas9(H840A) Nickase，能在 sgRNA 靶序列所在的DNA 鏈上產(chǎn)生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，可以減少意外的脫靶基因修飾。
