方法

序號(hào)

現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)

在意見(jiàn)稿中修改的內(nèi)容

修改說(shuō)明

多

管

發(fā)

酵

法

1

設(shè)備材料規(guī)格不全或者同具體操作不對(duì)應(yīng)

增加無(wú)菌試管規(guī)格35 mm×200 mm或其他適宜規(guī)格、無(wú)菌小倒管規(guī)格6 mm×30 mm、13 mm×100 mm或其它適宜規(guī)格；增加無(wú)菌吸管項(xiàng)代替現(xiàn)行無(wú)菌定量分裝器；增加pH計(jì)或pH比色管或精密pH試紙項(xiàng)；刪除電子天平、顯微鏡、電爐項(xiàng)。

一般性修訂：檢驗(yàn)設(shè)備更加完善，且適用于具體操作步驟。

2

礦泉水水源水推測(cè)性檢測(cè)水樣量為10mL、1mL、0.1mL各5管。MPN表為總接種量為55.5mL對(duì)應(yīng)的MPN表

礦泉水水源水檢測(cè)修改為15管發(fā)酵法，同時(shí)修改推測(cè)性檢測(cè)水樣量為100mL、10mL、1mL各5管。修改MPN表為總接種量為555mL對(duì)應(yīng)的MPN表。

檢驗(yàn)方法的重大修訂：增加檢測(cè)水樣量，減少由于水樣取樣量太少導(dǎo)致的結(jié)果不具有代表性，使結(jié)果更加準(zhǔn)確。

3

直接飲用礦泉水檢測(cè)方法是5管MPN法，MPN表是5管MPN表

直接飲用礦泉水檢測(cè)方法修改為6管發(fā)酵法，在原標(biāo)準(zhǔn)的5管10mL接種量基礎(chǔ)上增加1管50mL接種到50mL雙料培養(yǎng)基步驟，共6管；修改對(duì)應(yīng)MPN表從5管MPN表修訂為6管MPN表。

4

推測(cè)性實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)時(shí)間為25h，確證性培養(yǎng)時(shí)間為48h

推測(cè)性實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)時(shí)間改為24±2h，確證性實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)時(shí)間改為48±2h。

一般性修訂：增加溫度范圍，修改更加合理。

5

確證實(shí)驗(yàn)用到的亮綠乳糖膽鹽培養(yǎng)液(BGLB)的裝量沒(méi)有體現(xiàn)

明確亮綠乳糖膽鹽培養(yǎng)液的裝量為10mL。

一般性修訂：指定裝量，檢驗(yàn)更明確。

濾

膜

法

6

設(shè)備材料不全

無(wú)菌濾膜修訂為無(wú)菌親水性微孔濾膜；無(wú)菌抽濾設(shè)備修訂為過(guò)濾設(shè)備；增加培養(yǎng)箱、顯微鏡、冰箱、pH計(jì)項(xiàng)目；培養(yǎng)基增加無(wú)菌生理鹽水、無(wú)菌磷酸鹽緩沖液、營(yíng)養(yǎng)瓊脂項(xiàng)。

一般性修訂：材料設(shè)備更加全面，文字描述更加規(guī)范。

7

沒(méi)有濾膜法檢驗(yàn)流程圖

增加濾膜法檢驗(yàn)流程圖。

一般性修訂：檢驗(yàn)流程表格化，清晰明白

8

沒(méi)有指定稀釋液種類(lèi)

明確水樣稀釋液為無(wú)菌生理鹽水或者無(wú)菌磷酸鹽緩沖液。

一般性修訂：指定具體培養(yǎng)基，檢驗(yàn)更明確。

9

濾膜法確證實(shí)驗(yàn)挑取可疑菌落數(shù)為3個(gè)（不足3個(gè)全挑）

按比例挑取10個(gè)不同形態(tài)的可疑菌落（不足10個(gè)則全挑）。

較大修訂：增加確證實(shí)驗(yàn)挑菌數(shù)，使結(jié)果更具代表性。

10

沒(méi)有菌落純培養(yǎng)過(guò)程

增加可疑菌落在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上的純培養(yǎng)過(guò)程。

一般性修訂：避免選擇性平板的菌落會(huì)影響生化鑒定結(jié)果；同時(shí)有助于分離出單菌落，便于下一步鑒定。

11

計(jì)算方法簡(jiǎn)單

計(jì)算方法增加確證菌同可疑菌的比值，同時(shí)計(jì)入稀釋因子。

較大修訂：計(jì)算方法更加科學(xué)合理。

序號(hào)

現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)

在意見(jiàn)稿中修改的內(nèi)容

修改說(shuō)明

1

設(shè)備材料不全，表述不規(guī)范，培養(yǎng)基種類(lèi)不全

無(wú)菌濾膜修改為無(wú)菌親水性微孔濾膜，無(wú)菌抽濾修訂為過(guò)濾設(shè)備，修改無(wú)菌刻度吸管項(xiàng)為無(wú)菌吸管，修改無(wú)菌培養(yǎng)皿為無(wú)菌平皿直徑：90mm；刪除無(wú)菌量筒、無(wú)菌試管、高壓蒸汽滅菌器、酒精燈項(xiàng)。冰箱溫度改為2-8℃；培養(yǎng)基腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基、腦-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基修為腦心浸液液態(tài)培養(yǎng)基、腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基；增加無(wú)菌生理鹽水、無(wú)菌磷酸鹽緩沖液、革蘭氏染色液、3%過(guò)氧化氫溶液、膽汁液態(tài)培養(yǎng)基。

一般性修訂：設(shè)備材料更加完善，文本表述更規(guī)范具體，補(bǔ)充整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程涉及到的培養(yǎng)基。

2

推測(cè)性實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)時(shí)間為48h

推測(cè)性實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)時(shí)間改為48±2h。

一般性修訂：增加溫度范圍，修改更加合理。

3

濾膜法確證實(shí)驗(yàn)挑取可疑菌落數(shù)為不少于5個(gè)（不足5個(gè)全挑）

按比例挑取10個(gè)不同形態(tài)的可疑菌落（不足10個(gè)則全挑）。

較大修訂：增加確證實(shí)驗(yàn)挑菌數(shù)，使結(jié)果更具代表性。

4

直接挑取KF平板可疑菌落染色鏡檢

挑取KF平板可疑菌落在腦心浸液瓊脂平板后純培養(yǎng)后再染色鏡檢。

一般性修訂：純培養(yǎng)后的染色鏡檢結(jié)果更可靠，且方便后續(xù)的生化鑒定。

5

過(guò)氧化氫酶實(shí)驗(yàn)沒(méi)有規(guī)定3%過(guò)氧化氫滴加量以及滴加后的氣泡觀察時(shí)間

明確滴加3%過(guò)氧化氫溶液2-3滴，同時(shí)觀察明確時(shí)間30s。

一般性修訂：明確具體檢驗(yàn)。

6

用接種環(huán)從腦-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移一環(huán)培養(yǎng)物到腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基內(nèi),在45 ℃培養(yǎng)48h。此外,也同時(shí)轉(zhuǎn)移一環(huán)培養(yǎng)物到膽汁液態(tài)培養(yǎng)基中

用接種環(huán)從腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基平板上挑取單菌落到腦心浸液液態(tài)培養(yǎng)基內(nèi)，在45 ℃±1 ℃培養(yǎng)48 h±2 h。同時(shí)挑取單菌落到膽汁液態(tài)培養(yǎng)基中 。

一般性修訂：意見(jiàn)稿修改一環(huán)培養(yǎng)物為單菌落，同時(shí)增加溫度時(shí)間范圍，檢驗(yàn)流程更加科學(xué)，表述更加規(guī)范。

7

結(jié)果報(bào)告沒(méi)有給出具體的計(jì)算方法

明確給出計(jì)算公式

較大修訂：計(jì)算公式更加科學(xué)。

序號(hào)

現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)

在意見(jiàn)稿中修改的內(nèi)容

修改說(shuō)明

1

設(shè)備材料方面不全

增加“無(wú)菌濾器、過(guò)濾設(shè)備、無(wú)菌無(wú)齒鑷子、無(wú)菌平皿、pH 計(jì)或 pH 比色管或精密 pH 試紙”。

一般性修訂：檢驗(yàn)設(shè)備更詳盡。

2

銅綠假單胞菌未指明具體的水樣稀釋液

水樣稀釋液明確為“無(wú)菌生理鹽水”或“無(wú)菌磷酸鹽緩沖液”。

明確稀釋液及強(qiáng)調(diào)無(wú)菌要求。

3

可疑菌落分別計(jì)數(shù)后，沒(méi)有明確是否需接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂純化后再做生化確證

明確了可疑菌落計(jì)數(shù)后接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂分純培養(yǎng)后，再進(jìn)行生化試驗(yàn)。

一般性修訂：分純一方面方便可疑菌落的保存，另一方面分純后的可疑菌落是經(jīng)過(guò)擴(kuò)繁的，后續(xù)生化實(shí)驗(yàn)不用擔(dān)心可疑菌落不夠用或者接種量少影響試驗(yàn)結(jié)果。

4

未明確哪些可疑菌落需進(jìn)行綠膿菌素試驗(yàn)確證

明確只是濾膜上所有顯藍(lán)色和綠色的菌落需進(jìn)行綠膿菌素試驗(yàn)確證。

一般性修訂：在CN上非藍(lán)/綠色菌落，不一定產(chǎn)綠膿菌素特征，所以明確綠膿菌素確證只是針對(duì)藍(lán)/綠色菌落。

5

發(fā)熒光非藍(lán)色或非綠色菌落需進(jìn)行產(chǎn)氨試驗(yàn)確證。

發(fā)熒光非藍(lán)色或非綠色菌落除了做產(chǎn)氨試驗(yàn)外，還增加了42℃生長(zhǎng)試驗(yàn)。

較大修訂：由于熒光假單胞菌42℃不生長(zhǎng)，因此，該試驗(yàn)可區(qū)分熒光假單胞菌和銅綠假單胞菌。

6

在100級(jí)潔凈工作臺(tái)進(jìn)行過(guò)濾操作

刪除在100級(jí)潔凈工作臺(tái)進(jìn)行過(guò)濾操作的要求。

一般性修訂：由于過(guò)濾操作需潔凈環(huán)境操作即可，且過(guò)濾系統(tǒng)放在超凈工作臺(tái)中，不方便操作，因此，不強(qiáng)制要求在100級(jí)潔凈工作臺(tái)進(jìn)行過(guò)濾操作。

7

CN瓊脂培養(yǎng)時(shí)間：24-48h

CN瓊脂培養(yǎng)時(shí)間修改為20-48h。

一般性修訂

8

產(chǎn)氨試驗(yàn)無(wú)觀察時(shí)間要求

產(chǎn)氨試驗(yàn)，明確添加鈉氏試劑需10s內(nèi)觀察結(jié)果。

一般性修訂：滴加試劑后，延長(zhǎng)觀察時(shí)間會(huì)有假陽(yáng)性。

9

菌落計(jì)算公式

菌落計(jì)算公式修改為

較大修訂：根據(jù)確證試驗(yàn)項(xiàng)目修改進(jìn)行相應(yīng)的修改。

10

陰性對(duì)照菌株為熒光假單胞菌

陰性對(duì)照菌株更改為惡臭假單胞菌。

較大修訂：部分熒光假單胞菌在37℃的條件下不生長(zhǎng)。

序號(hào)

現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)

在意見(jiàn)稿中修改的內(nèi)容

修改說(shuō)明

1

設(shè)備材料：濾膜孔徑：0.22μm

方法提要：濾膜孔徑：0.45μm

濾膜孔徑：0.45μm

一般性修訂：明確濾膜孔徑為0.45μm ，GB 8538各菌檢驗(yàn)使用0.45μm規(guī)格的濾膜即可完成GB 8538的各項(xiàng)微生物檢驗(yàn)。

2

計(jì)數(shù)培養(yǎng)基：SPS

計(jì)數(shù)培養(yǎng)基：TSC

檢驗(yàn)方法的重大修訂：TSC為GB 4789及FDA檢驗(yàn)產(chǎn)氣莢膜梭菌所采用的培養(yǎng)基，與SPS相比，產(chǎn)氣莢膜梭菌在TSC上產(chǎn)生黑色中心的效果優(yōu)于SPS。

3

過(guò)濾完成后濾膜放置于培養(yǎng)基后即可培養(yǎng)

過(guò)濾完成后新增操作：傾注5 mL-10 mL冷卻至50℃的TSC瓊脂均勻覆蓋濾膜表面。

檢驗(yàn)方法的重大修訂：傾注一層薄培養(yǎng)基覆蓋濾膜不影響菌落挑取，菌落處于培養(yǎng)基內(nèi)部的話(huà)，菌落產(chǎn)黑的特征更優(yōu)。

4

確證試驗(yàn)包含卵磷脂分解試驗(yàn)

確證實(shí)驗(yàn)刪除卵磷脂分解試驗(yàn)，增加了乳糖-明膠試驗(yàn)。

檢驗(yàn)方法的重大修訂：部分巴氏梭菌在含鐵牛奶培養(yǎng)基上也呈暴烈發(fā)酵的現(xiàn)象，乳糖明膠試驗(yàn)可以區(qū)分。此外，一些產(chǎn)氣莢膜梭菌磷脂酶活性較弱，可能會(huì)造成卵磷脂分解試驗(yàn)假陰性的情況。

5

陰性對(duì)照菌株：絕對(duì)厭氧菌

陰性對(duì)照菌株：艱難梭菌

較大修訂：絕對(duì)厭氧菌株包含艱難梭菌、生孢梭菌等多種菌株，修改后明確為艱難梭菌，給予了實(shí)驗(yàn)人員明確的指示。

6

無(wú)計(jì)算公式

結(jié)果報(bào)告新增計(jì)算公式

一般性修訂。

7

培養(yǎng)基和試劑：

動(dòng)力-硝酸鹽培養(yǎng)基(B法)

動(dòng)力-硝酸鹽培養(yǎng)基(B法)

確證實(shí)驗(yàn)：動(dòng)力-硝酸鹽培養(yǎng)基

培養(yǎng)基和試劑：緩沖動(dòng)力硝酸鹽

確證實(shí)驗(yàn)：明確動(dòng)力試驗(yàn)及硝酸鹽還原試驗(yàn)采用緩沖動(dòng)力硝酸鹽培養(yǎng)基，新增操作“如果不出現(xiàn)顏色變化，則加少許鋅粉，放置 10 min，出現(xiàn)紅色者，表明該菌株不能還原硝酸鹽。

一般性修訂。

8

可疑菌落的挑取數(shù)量：3-5個(gè)

可疑菌落的挑取數(shù)量：按比例挑取 10 個(gè)不同形態(tài)的可疑菌落（不足 10 個(gè)則全挑）。

較大修訂：增加確證菌落數(shù)。