071770 副溶血性弧菌細(xì)菌生化鑒定盒(15種×5次)
一)整套試劑及用品
鑒定生化反應(yīng)的10種試劑(表1)、10瓶0.85%無菌生理鹽水、1瓶0.5 McFarland的濁度管、10支一次性吸管。
二)西林瓶的使用方法
開啟西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在無菌條件下，按鋁蓋上的箭頭方向打開鋁蓋，撕開鋁蓋，打開西林瓶膠塞(如圖1)。所有的西林瓶在使用后均高壓滅菌后方可棄去。
三)副溶血性弧菌生化鑒定盒的詳細(xì)使用方法
副溶血性弧菌為革蘭氏陰性無芽胞桿菌，易呈多形態(tài)，有棒狀、弧狀、卵圓狀、球狀、絲狀等，排列不規(guī)則，一般大小為0.3～0.7μm×1～2μm，單端一根鞭毛，有動(dòng)力，運(yùn)動(dòng)活潑，兩端濃染，在固體培養(yǎng)條件下能生長周鞭毛。菌落常為隆起，圓形，稍渾濁不透明，表面光滑，濕潤，不產(chǎn)生色素。
挑取平板分離的可疑菌落劃線接種3%NaCl胰蛋白胨大豆瓊脂平板35－37℃培養(yǎng)18－24h，革蘭氏染色鏡檢，并將新鮮菌苔置于已配備的無菌生理鹽水中，與0.5 McFarland的濁度管比濁，將菌懸液制備成0.5McFarland ( 約108cfu/mL )，用吸管吸取2滴（約0.06mL）菌懸液加入每種微量生化管內(nèi)。將已接種的西林瓶再套上膠塞，一般采用全加塞（如圖2左兩瓶所示），特殊情況在下表注明采用半加塞（如圖2右兩瓶所示），直立于內(nèi)托的凹槽內(nèi)（如圖2），或放置于合適的瓶架中，于35－37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，結(jié)果觀察見表1。
注意：如有特殊的接種方式、培養(yǎng)時(shí)間或培養(yǎng)方式，請?jiān)斠娒糠N生化鑒定管附帶的使用說明。
表一
|
產(chǎn)品名稱 |
結(jié)果判定 |
結(jié)果觀察 時(shí)間（小時(shí)） |
使用說明 | |
|
陽性 |
陰性 | |||
|
氧化酶試劑 |
藍(lán)紫色 |
不變色 |
30秒內(nèi) | 滴加1滴試劑到一小塊潔凈濾紙上，以剛剛浸濕為宜；用玻棒或接種環(huán)（鉑或塑料）挑取適量新鮮菌苔涂在紙片上。 |
|
3％NaCl半固體 |
擴(kuò)散生長 |
無擴(kuò)散生長 |
24—48 | 用接種針挑取新鮮菌苔穿刺接種，豎立培育。 |
|
無鹽胨水、3％NaCl胨水、6％NaCl胨水、8％NaCl水、10％NaCl胨水 |
生長 |
不生長 |
24 |
|
|
3%NaCl甘露醇、 3％NaCl蔗糖 3％NaCl乳糖 |
黃色 |
紫色 |
8－24 |
|
|
3％NaCl葡萄糖（產(chǎn)氣） |
黃色，小倒管有氣泡 |
紫色，小倒管無氣泡 |
18—24 | 使用前先確定倒管內(nèi)無氣泡。 |
|
3%NaCl賴氨酸脫羧酶
|
試驗(yàn)管綠色或黃綠色，對照管變黃 | 試驗(yàn)管與對照管均變黃 |
18－24 | 每株被檢菌應(yīng)同時(shí)接種氨基酸對照管一支，并加滅菌液體石蠟3－4滴覆蓋培養(yǎng)基表面。培養(yǎng)18－24小時(shí)，未見陽性結(jié)果，繼續(xù)培養(yǎng)4天，再做最終結(jié)果判定。 |
|
3%NaCl 葡萄糖磷酸鹽胨水（V-P） |
紅色 |
不變色 |
48 | 接種培養(yǎng)后依次加入8滴VP試劑甲液及4滴乙液，混勻，再培養(yǎng)10－20分鐘觀察結(jié)果。 |
|
β－半乳糖苷（ONPG） |
深黃色 | 淡黃色或無色 |
12－24 |
|
備注：本鑒定盒是按照環(huán)凱產(chǎn)品目錄中的品種成份從左到右的順序擺放。
四）副溶血性弧菌的生化特性見表2
表2 副溶血性弧菌的生化性狀
試驗(yàn)項(xiàng)目 | 結(jié)果 |
革蘭氏染色鏡檢 | 陰性，無芽胞，呈棒狀、弧狀、卵圓狀 |
氧化酶 | + |
3%NaCl半固體 | 穿刺接種處擴(kuò)散生長，有動(dòng)力 |
無鹽胨水 | －或微弱生長 |
8% NaCl胨水 | + |
10％NaCl胨水 | －或微弱生長 |
蔗糖 | - |
乳糖 | - |
葡萄糖 | + |
分解葡萄糖（產(chǎn)氣） | - |
甘露醇 | + |
賴氨酸脫羧酶 | + |
硫化氫 | - |
V-P | － |
ONPG | － |
表3 副溶血性弧菌主要性狀與其他弧菌的鑒別（必要時(shí)做，本鑒定盒沒有提供整套相應(yīng)的生化管，需另買單盒)
|
名稱 |
氧化酶 |
賴氨酸 |
精氨酸 |
鳥氨酸 |
明膠 |
脲酶 |
V ︱P |
|
蔗糖 |
D︱纖維二糖 |
乳糖 |
阿拉伯糖 |
D︱甘露糖 |
D︱甘露醇 |
ONPG | 嗜鹽性試驗(yàn) NaCl含量（％） | ||||
|
0 |
3 |
6 |
8 |
10 | ||||||||||||||||
|
副溶血性弧菌 |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
V |
－ |
＋ |
－ |
V |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
|
創(chuàng)傷弧菌 |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
V |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
|
溶藻弧菌 |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
＋ |
|
霍亂弧菌 |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
V |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
|
擬態(tài)弧菌 |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
|
河弧菌 |
＋ |
－ |
＋ |
－ |
＋ |
－ |
－ |
V |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
V |
－ |
|
弗氏弧菌 |
＋ |
－ |
＋ |
－ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
＋ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
|
梅氏弧菌 |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
－ |
＋ |
V |
＋ |
－ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
V |
－ |
|
霍利斯弧菌 |
＋ |
－ |
－ |
－ |
－ |
－ |
－ |
nd |
－ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
注：nd 表示未試驗(yàn);V表示可變。
